文章亮点:
1.该研究对远志活性物质的酶解联合超声提取工艺进行了优化
2.对提取物的体外抗氧化活性进行分析
文章思路:
一、试验方法
1.远志总皂苷的提取:精确称取一定质量的纤维素酶置于50mL三角瓶中,加入30mL配制好的不同pH的缓冲液,在30℃恒温水浴锅中活化20min,向缓冲液中加入2g远志粉末,恒温酶解一定时间,酶解结束后在85℃水浴锅中灭活。将缓冲液在65℃下旋转蒸发至溶液呈糊状,按料液比1:30g·mL-1加入70%乙醇,在200W、30℃下超声提取15min,过滤后取滤液加入相同体积的石油醚充分振荡脱脂,取下层乙醇旋转蒸发至干燥,用50mL甲醇定容后测定总皂苷含量。
2.纤维素酶-超声提取工艺的单因素试验
3.纤维素酶-超声提取工艺的响应面试验
如表1所示的因素和水平,固定超声功率200W、超声时间15min、超声温度30℃、乙醇浓度70%、料液比1∶30g·mL-1,采用Design-Expert软件,应用Box-Behnken原理进行4因素3水平试验。
回归方程的方差分析结果见表3。
图2的响应面图可以对2个因素之间的交互效应进行更直观的分析。响应面的坡度可以反映处理条件的变化对试验指标的影响,若坡度越陡峭,则响应值对处理条件的变化越敏感。
根据最佳工艺预测值将试验条件确定为:加酶量1.2%、酶解pH3.6、酶解温度42℃、酶解时间63min,在此条件下重复提取3次,计算平均值,测得远志总皂苷提取率为2.2280%
4.远志提取物的液质分析
纤维素酶-超声法所得远志提取物在负离子模式下的总离子流图如图3所示,共检测到约20个色谱峰,通过分析各化合物的色谱保留时间、相对分子质量以及碎片离子信息,并结合相关文献数据初步推测出其中2个色谱峰,结果如表4所示。
二、项目测定
1.远志总皂苷含量测定
以远志皂苷元为对照品,采用香草醛-高氯酸法测定总皂苷的含量。
2.DPPH·清除能力测定
3.ABTS+·清除能力测定
4.总抗氧化能力测定
参考文献:郭丽丽,郭如洹,秦楠,王小敏,张茜.远志提取物的工艺、成分及抗氧化活性[J].北方园艺,(13):-.
文献整理:李小英
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